BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格CAT#: BFNC86071-01(10×100ul)/BFNC86071-02(50×100ul)

BL21 Star(DE3)pLysS：                               100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                    10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                             -80℃（6個月）

基因型

F^- ompT hsdS_B(r_B^- m_B^- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (Cam^R)

產(chǎn)品說明

BL21 Star(DE3)pLysS菌株來源于BL21(DE3)，含有rne131突變（RNaseE基因），RNaseE基因的突變降低了內(nèi)源RNase的積累，增強菌株細(xì)胞內(nèi)mRNA的穩(wěn)定性，從而提高異源蛋白的表達(dá)水平。主要適用于T7啟動子表達(dá)載體(如pET系列)的高水平蛋白表達(dá)，同時含有大腸桿菌RNA聚合酶，也可用于非T7啟動子表達(dá)載體（pGEX，pMAL等）的蛋白表達(dá)。由于BL21 Star(DE3)菌株的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)水平較高，所以不適合毒性蛋白的表達(dá)。BL21 Star(DE3)pLysS菌株攜帶pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表達(dá)T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，還可與T7 RNA聚合酶結(jié)合抑制其轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)而降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)。pLysS質(zhì)粒含有p15A復(fù)制起始子，可以和含有 pUC或pBR322等復(fù)制起始子的質(zhì)粒兼容。

青旗生物生產(chǎn)的BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. BL21 Star(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的質(zhì)粒并用手bo打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

BL21 Star(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

IPTG

Prepare a 1 M solution of IPTG (Isopropyl-β-D-thiogalactoside; Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside) by

dissolving 2.38 g of IPTG in dd water and adjust the final volume to 10 ml. Filter sterilize before use.

注意事項

1. 感受態(tài)細(xì)胞盡量在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。

5. 為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

6. BL21 Star(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。